Padronização e validação de elisa indireto para o diagnóstico da leptospirose bovina

Abstract

A leptospirose é uma zoonose que causa sérios danos à saúde dos animais. Por se tratar de uma das doenças de maior impacto econômico, o correto diagnóstico e vigilância epidemiológica são fundamentais para o controle da infecção. Objetivou-se padronizar e validar o teste de ELISA indireto empregando proteínas de membrana externa (PME) do sorovar Hardjo como antígeno (ELISA-PME/Hardjo), tendo o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM) como referência. O ELISA-PME/Hardjo foi padronizado utilizando-se amostras de soro de 15 bovinos positivos e 15 negativos no exame de SAM. A PME/Hardjo foi avaliada nas concentrações de 0,35 µg/µL, 0,17 µg/µL, 0,08 µg/µL e 0,04 µg/µL. As amostras de soro foram testadas nas diluições 1:50, 1:100, 1:500 e 1:1000, e o conjugado anti IgG 1:5000 e 1:10000. A validação do teste foi feita utilizando-se 218 amostras de soro bovino. A padronização do ELISA-PME/Hardjo indicou que a melhor concentração protéica para sensibilização da placa foi de 0,08 µg/µL, diluição do anticorpo primário 1:50 e do conjugado anti-IgG 1:5000. Das 218 amostras submetidas ao teste de SAM, 86 (39%) foram positivas, e 132 (61%) negativas. Já o ELISA-PME/Hardjo identificou 121 (55%) amostras positivas e 97 (45%) negativas. A sensibilidade foi de 100% e especificidade 73%. A comparação dos testes de SAM e ELISA demonstrou concordância de 0,83% e índice Kappa de 0,68 (p<0,0001). O ELISA-PME/Hardjo mostrou ser um teste sensível, indicando seu uso potencial como exame de triagem no diagnóstico da leptospirose bovina.