Isolamento de uma fracao enriquecida em sinaptosomas de cerebro da abelha Apis mellifera utilizando gradiente descontínuo de percoll e identificacao de miosinas V e VI

Abstract

Os sinaptosomas são estruturas vesiculares obtidas do sistema nervoso e constituem excelentes modelos experimentais utilizados para pesquisas sobre transmissão sináptica. Este trabalho mostra a preparação de sinaptosomas de cérebro da abelha A. mellifera a partir de uma fração solúvel aplicada sobre gradiente descontínuo de Percoll. A separação resultou em quatro frações subcelulares. Os resultados de "Western blotsâ€? mostraram a distribuição específica da clatrina, miosinas V e VI na camada correspondente a 15% do gradiente descontínuo de Percoll-sacarose. A análise por meio de microscopia eletrônica revelou que esta fração também é enriquecida em sinaptosomas. Frações enriquecidas em vesículas sinápticas de cérebro de abelha e a sua relação com proteínas motoras são importantes ferramentas para investigar as bases moleculares do sistema nervoso da abelha em diferentes estágios de desenvolvimento e condições comportamentais. UNITERMOS: Cérebro de abelha, Sinaptosomas, Vesículas sinápticas, Miosina V, Miosina VI, Apis mellifera. ABSTRACT: Synaptosomes have been used as model system for investigating presynaptic phenomena. In the present study, we describe the synaptosome preparation of Apis mellifera brain. A S1 brain fraction in Percoll gradient originated four subcellular fractions. "Western blotsâ€? data show that myosin V, myosina VI and clathrin are in the 3nd fraction. As demonstrated by electron microscopy, synaptosomes were found in this fraction. Based on the presence of myosin V and VI in the fractions containing synaptosomes, we suggest their association with synaptic vesicles. The attainment of synaptic vesicle enriched fractions from bee brain and the investigation of the motor proteins are important tools to investigate, in a molecular basis, the nervous system of bees in different development and behavioral conditions. UNITERMS: Honeybee brain, Synaptosomes, Synaptic vesicle, Myosin V, Myosin VI, Apis mellifera.