Avaliações das propriedades catalíticas e cinéticas da betaglucosidase isoladas de um fungo antagonísta altamente eficiente Trichoderma harzianum

Resumo

Devido à toxicidade e ineficiência dos fungicidas químicos para controlar a infestação de Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid que causa o apodrecimento das plantas, uma abordagem biotecnológica usando βglicosidase (EC.3.2.1) como o ingrediente bioativo alternativo do fungicida é por este meio, proposto. A enzima extracelular foi isolada de um antagonista fúngico altamente eficiente, o Trichoderma harzianum T12. As massas moleculares altamente similares obtidas usando SDS-PAGE (96 kDa) e espectrometria de massa MALDI-TOF (98,3 kDa) afirmaram que a β-glicosidase foi purificada até a homogeneidade. Consequentemente, os parâmetros catalíticos ótimos que apresentaram a maior atividade enzimática foram: 45˚C, pH 7, tamanho do inóculo de 10% (p / v), suplementação com íons de metais Zn2+ e Mn2+, e Tween 80. Adição de farelo de trigo e (NH4) 2SO4 como fontes de carbono e nitrogênio também melhoraram a atividade enzimática. O BLASTn mostrou que a sequência da β-glicosidase T12 era altamente idêntica a outras β-glicosidase viz. A estirpe T. harzianum IOC-3844 (99%), T. gamsii e T. virens bgl1 (86%) assim como
a estirpe T. reesei SJVTR e a estirpe T. viride AS 3.3711 (84%). A avaliação cinética mostrou que β-glicosidase T12 catalisa a actividade hidrolítica caracterizada por um Km de 0,79 mM e Vmax de 8,45 mM min-1 mg-1 de proteína, com um correspondente kcat de 10,69 s-1.