Xylanase gene mutation by error-prone pcr and expression in Pichia pastoris

Shuli Li; Weiwei Huang; Juan Chang; Ping Wang; Qingqiang Yin; Chaoqi Liu; Erzhu Wang; Fushan Lu

doi:10.14393/BJ-v34n3a2018-38530

Autores

Shuli Li College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
Weiwei Huang College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
Juan Chang College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
Ping Wang College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
Qingqiang Yin College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University
Chaoqi Liu College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China
Erzhu Wang Henan Delin Biological Product Co. Ltd., Xinxiang 453000, China
Fushan Lu Henan Engineering and Technology Research Center of Feed Microbes, Zhoukou 466000, China

DOI:

https://doi.org/10.14393/BJ-v34n3a2018-38530

Palavras-chave:

Error-prone PCR, Xylanase, Gene mutation, Gene expression, Pichia pastoris

Resumo

A xilanase pode hidrolisar o xilano para reduzir seu impacto antinutricional e melhorar a disponibilidade de nutrientes, portanto, obter xilanase adequada para degradar o xilano é essencial. A PCR propensa a erros e a transformação genética foram utilizadas neste estudo para obter a xilanase ideal para degradar eficazmente a xilana. O resultado mostrou que um gene mutante de xilanase com alta expressão de xilanase foi obtido. Depois que o gene mutante da xilanase foi conectado ao pGAPZαA e transformado em Pichia pastoris (P. pastoris), o recombinante P. pastoris com o gene mutante produziu maior atividade de xilanase (0,1480 U / mL) do que com o gene nativo da xilanase (0,1360 U / mL) após 12 h de incubação (p <0,05). A temperatura e o pH ótimos da xilanase expressa pelos genes nativos e mutantes foram os mesmos, ou seja, 40 ºC e 5,50 (p <0,05). Além disso, a adição de Tween 80 a 0,2% durante a incubação de P. pastoris recombinante poderia aumentar significativamente o rendimento de xilanase em cerca de 30-35% (p <0,05). A xilanase mutante poderia aumentar significativamente o rendimento de xilose da farinha de trigo mais do que a xilanase nativa (p <0,05).