Seleção e Caracterização de Peptídeos de Leishmania (Leishmania) amazonensis por "Phage Displayâ€?

Resumo

As leishmanioses representam infecções endêmicas que ocorrem, predominantemente, em regiões tropicais e subtropicais. Estas doenças são causadas por parasitos do gênero Leishmania, sendo transmitidas por diferentes espécies de mosquitos e apresentam um amplo espectro de manifestações clínicas, dentre elas a Leishmaniose Tegumentar, caracterizadas por lesões cutâneas. A tecnologia de exposição de biomoléculas em fagos ("Phage Displayâ€?) tem sido amplamente utilizada no mapeamento de epítopos de diversas proteínas antigênicas, constituintes de vários agentes causadores de doenças. O "Biopanningâ€? ou procedimento de seleção é feito pela incubação da biblioteca de peptídeos expostos em fagos contra um alvo. O intuito deste trabalho foi selecionar peptídeos recombinantes diretamente relacionados a antígenos totais de Leishmania amazonensis, através de eluição competitiva e avaliar a reatividade diferencial dos clones frente aos anticorpos utilizados para seleção (IgG), buscando clones com potencial diagnóstico por meio de análises de bioinformática e testes imunológicos. O procedimento de "biopanningâ€? foi realizado em solução, utilizando resinas de proteína A agarose, e após a interação entre os anticorpos alvo e os fagos recombinantes, foi feita eluição competitiva com extratos totais de L. amazonensis. Após 4 ciclos de seleção, 92 clones foram selecionados e submetidos a testes ELISA para seleção dos clones de reatividade relevante, e assim, foram seqüenciados 36 clones, que demonstraram 22 seqüências distintas. Análises de bioinformática demonstraram relação dos peptídeos recombinantes com proteínas de potencial interesse diagnóstico.