USO DO AZUL DE TOLUIDINA E ALARANJADO DE ACRIDINA NA AVALIAÇÃO COMPUTACIONAL DA COMPACTAÇÃO CROMATaNICA DE ESPERMATOZÓIDES DE GALO

Resumo

O objetivo desse trabalho foi testar novas variantes metodológicas utilizando coloração com azul de toluidina (AT) e alaranjado de acridina (AO) e estabelecer um protocolo para a avaliação computacional da compactação cromatínica em espermatozóides de galo. Foram utilizadas 20 amostras de sêmen de galo de duas diferentes idades: com 35 e 60 semanas. Foram testados diferentes métodos de fixação, desnaturação e coloração. O melhor método de fixação foi com formal salina. Não foi possível chegar a um método eficiente de coloração com AO. O melhor método com AT foi a hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com azul de toluidina 0,025%, pH 4,0, por 20 minutos e posterior desidratação, diafanização e montagem. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e avaliadas computacionalmente, onde foram mensuradas as cabeças dos espermatozóides quanto a área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da coloração da cabeça e a diferença porcentual do valor médio dos pixels que compõem a cabeça em relação ao valor médio dos pixels de cabeças padrões. Os espermatozóides dos galos jovens apresentaram cabeças maiores do que os dos galos velhos. Os semens de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina dos espermatozóides do que os de galos jovens; tanto alterações na homogeneidade da cromatina como na compactação propriamente dita. A análise computacional de esfregaços corados com AT mostrou ser mais eficiente do que a avaliação visual de esfregaços corados com alaranjado de acridina para identificação de alterações na compactação de cromatina de espermatozóides de galo.